دوره 15، شماره 45 - ( 6-1393 )
جلد 15 شماره 45 صفحات 16-9 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Shahbazi B, Narenji H. Comparison of four methods of DNA extraction from gram-negative and gram-positive bacteria. Zanko J Med Sci 2014; 15 (45) :9-16
URL: http://zanko.muk.ac.ir/article-1-32-fa.html
URL: http://zanko.muk.ac.ir/article-1-32-fa.html
شهبازی بابک، نارنجی هنار. مقایسه چهار روش استخراج DNA از باکتری‌های گرم منفی و گرم مثبت. مجله علوم پزشکی زانکو. 1393; 15 (45) :9-16
چکیده: (18836 مشاهده)
چکیده
زمینه و هدف: استخراج DNA، اولین مرحله در اجرای تحقیقات مهندسی ژنتیک می‌باشد و بدست آوردن پروتکل مناسب برای تهیه یک DNA خالص، اهمیت بسزایی در تحقیقات مهندسی ژنتیک دارد؛ به همین دلیل برای آن روش‌های گوناگونی ارائه شده است. در تحقیق حاضر، چهار روش مختلف استخراج DNA از باکتری‌های گرم منفی و گرم مثبت از لحاظ کارایی هر کدام از روش‌ها و مقایسه آن‌ها با یکدیگر، مورد بررسی و آزمون قرار گرفته است. هدف این مقاله، دستیابی به روشی سریع‌تر و کم هزینه تر استخراج DNA ژنومی برای باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی است.
روش بررسی: در این مطالعه، از باکتری‌های استافیلوکوکوس اورئوس و ویبریوکلرا سوسپانسیون های باکتری، معادل کدورت نیم مک فالند تهیه شد. سپس به چهار روش: کیت تجاری، جوشاندن، فنل کلروفرم و روش دترجنت رختشویی، DNA استخراج و هرکدام از روش‌ها در قالب طرح کامل تصادفی سه بار تکرار شد. غلظت‌های نمونه های استخراج شده با استفاده از دستگاه نانودراپ و ژل الکتروفورز اندازه گیری شد. در ادامه، جهت بررسی کارایی DNA استخراج شده در انجام فرایند های پایین دستی، تست‌های PCR , REP PCR و ERIC PCR اختصاصی برای باکتری‌های نام برده انجام شد.
یافته‌ها: بررسی غلظت DNA های استخراج شده، نشان دهنده تفاوت چشمگیر میان باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی بود؛ همچنین تجزیه واریانس، تفاوت معنی داری بین این چهار روش نشان داد. انجام فرایندهای پایین دستی نشان داد: همه روش‌های نام برده به غیر از روش دترجنت رختشویی، برای انجام PCR در غلظت‌های معین مناسب می‌باشند؛ در روش REP PCR، DNA های استخراج شده به روش‌های جوشاندن، فنل-کلروفرم و کیت تجاری نتایج مورد انتظار را نشان دادند. روش ERIC PCR با DNA های استخراج شده در روش کیت تجاری باند‌های مورد نظر را نشان داد ولی در سایر روش‌ها هیچ باندی مشاهده نشد.
بحث و نتیجه گیری: از یافته های این تحقیق می‌توان نتیجه گرفت، با وجود حساسیت بیشتر پروتکل کیت تجاری سیناژن در مقایسه با سه روش دیگر، در مقابل، با توجه به زمان و هزینه کمتر و راندمان تقریباً مشابه دو روش فنول کلروفرم و جوشاندن خصوصاً روش جوشاندن، می‌توان از این روش برای استخراج DNA در باکتری‌های گرم منفی و مثبت استفاده کرد.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
تخصصي
دریافت: 1393/4/28 | پذیرش: 1393/6/12 | انتشار الکترونیک: 1393/6/25
دریافت: 1393/4/28 | پذیرش: 1393/6/12 | انتشار الکترونیک: 1393/6/25
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
