دوره 15، شماره 45 - ( 6-1393 )                   جلد 15 شماره 45 صفحات 9-16 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Shahbazi B, Narenji H. Comparison of four methods of DNA extraction from gram-negative and gram-positive bacteria. Zanko J Med Sci. 2014; 15 (45) :9-16
URL: http://zanko.muk.ac.ir/article-1-32-fa.html
شهبازی بابک، نارنجی هنار. مقایسه چهار روش استخراج DNA از باکتری‌های گرم منفی و گرم مثبت. مجله علوم پزشکی زانکو. 1393; 15 (45) :9-16

URL: http://zanko.muk.ac.ir/article-1-32-fa.html


چکیده:   (10368 مشاهده)
چکیده
 زمینه و هدف: استخراج DNA، اولین مرحله در اجرای تحقیقات مهندسی ژنتیک می‌باشد و بدست آوردن پروتکل مناسب برای تهیه یک DNA خالص، اهمیت بسزایی در تحقیقات مهندسی ژنتیک دارد؛ به همین دلیل برای آن روش‌های گوناگونی ارائه شده است. در تحقیق حاضر، چهار روش مختلف استخراج DNA از باکتری‌های گرم منفی و گرم مثبت از لحاظ کارایی هر کدام از روش‌ها و مقایسه آن‌ها با یکدیگر، مورد بررسی و آزمون قرار گرفته است. هدف این مقاله، دستیابی به روشی سریع‌تر و کم هزینه تر استخراج DNA ژنومی برای باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی است. 
روش بررسی: در این مطالعه، از باکتری‌های استافیلوکوکوس اورئوس و ویبریوکلرا سوسپانسیون های باکتری، معادل کدورت نیم مک فالند تهیه شد. سپس به چهار روش: کیت تجاری، جوشاندن، فنل کلروفرم و روش دترجنت رختشویی، DNA استخراج و هرکدام از روش‌ها در قالب طرح کامل تصادفی سه بار تکرار شد. غلظت‌های نمونه های استخراج شده با استفاده از دستگاه نانودراپ و ژل الکتروفورز اندازه گیری شد. در ادامه، جهت بررسی کارایی DNA استخراج شده در انجام فرایند های پایین دستی، تست‌های PCR , REP PCR و ERIC PCR اختصاصی برای باکتری‌های نام برده انجام شد. 
یافته‌ها: بررسی غلظت DNA های استخراج شده، نشان دهنده تفاوت چشمگیر میان باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی بود؛ همچنین تجزیه واریانس، تفاوت معنی داری بین این چهار روش نشان داد. انجام فرایندهای پایین دستی نشان داد: همه روش‌های نام برده به غیر از روش دترجنت رختشویی، برای انجام PCR در غلظت‌های معین مناسب می‌باشند؛ در روش REP PCR، DNA های استخراج شده به روش‌های جوشاندن، فنل-کلروفرم و کیت تجاری نتایج مورد انتظار را نشان دادند. روش ERIC PCR با DNA های استخراج شده در روش کیت تجاری باند‌های مورد نظر را نشان داد ولی در سایر روش‌ها هیچ باندی مشاهده نشد. 
بحث و نتیجه گیری: از یافته های این تحقیق می‌توان نتیجه گرفت، با وجود حساسیت بیشتر پروتکل کیت تجاری سیناژن در مقایسه با سه روش دیگر، در مقابل، با توجه به زمان و هزینه کمتر و راندمان تقریباً مشابه دو روش فنول کلروفرم و جوشاندن خصوصاً روش جوشاندن، می‌توان از این روش برای استخراج DNA در باکتری‌های گرم منفی و مثبت استفاده کرد.
واژه‌های کلیدی: استخراج DNA باکتری، PCR، ERIC PCR، REP PCR
متن کامل [PDF 504 kb]   (6686 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: تخصصي
دریافت: ۱۳۹۳/۴/۲۸ | پذیرش: ۱۳۹۳/۶/۱۲ | انتشار الکترونیک: ۱۳۹۳/۶/۲۵

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله علوم پزشکی زانکو می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2019 All Rights Reserved | Zanko Journal of Medical Sciences

Designed & Developed by : Yektaweb